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反相高效液相色譜柱的保護(hù)要怎么做

更新時(shí)間:2020-06-24 點(diǎn)擊次數(shù):2452
   反相高效液相色譜柱的填料常是以硅膠為基質(zhì),表面鍵合有極性相對(duì)較弱官能團(tuán)的鍵合相。反向色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng),通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分先被沖洗出,而極性弱的組分會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。
 
  選擇合適的色譜柱可以縮短方法開(kāi)發(fā)時(shí)間,并使開(kāi)發(fā)的方法更穩(wěn)定。色譜柱的選擇包括分離模式、色譜填料基質(zhì)及基質(zhì)物理化學(xué)性質(zhì)等。
 
  反相高效液相色譜柱的保護(hù):
  1、用預(yù)柱。(但要注意,若有時(shí)出峰異常,要先看看是不是它有問(wèn)題了)
 
  2、每次做完分析,都要進(jìn)行沖洗,分析用流動(dòng)相中若無(wú)酸、鹽類(lèi)物質(zhì),建議用90%甲醇沖洗30~60min;若分析用流動(dòng)相中含以上物質(zhì),要先用10%甲醇沖洗1小時(shí)左右,再梯度走到90%甲醇沖洗30~60min。有必要時(shí)再循環(huán)幾次,可以適當(dāng)縮短時(shí)間。
  若長(zhǎng)時(shí)間不用該色譜柱,要沖洗好后,用純甲酵或乙封存。
 
  3、若流動(dòng)相中用到離子對(duì)試剤,更應(yīng)該好好沖洗,且該色譜柱作為專(zhuān)用,不能再做其它物質(zhì)分析用。因色譜柱填料性質(zhì)已與原來(lái)所不同,在該柱上所摸索的色譜條件,可能在其它同類(lèi)柱子上得不到重現(xiàn)。
 
  4、盡量避免反沖,除非該色譜柱明確說(shuō)明允許。
 
  5、普通C18柱盡量避免在40℃以上的溫度下分析。
 
  6、定期測(cè)柱效,有下降,可以用10%異丙醇甲醇沖洗色譜柱。若柱效還沒(méi)有改善,可以再生,甲醇二氯甲烷一甲。

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